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HPLC泵的十個(gè)使用要點(diǎn)分析

更新時(shí)間:2019-04-25        閱讀:4184
HPLC是在經(jīng)典的液相色譜法基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的,其以液體作為流動(dòng)相,并采用顆粒極細(xì)的固定相的柱色譜分離技術(shù)。HPLC因其具有分離效能高、分析速度快、檢測(cè)靈敏度好、能分析和分離高沸點(diǎn)且不能氣化的熱不穩(wěn)定生理活性物質(zhì)的特點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、藥物及臨床分析,世界各國(guó)已將該法收載于藥典。

HPLC有五大系統(tǒng)構(gòu)成,其中,泵是HPLC的動(dòng)力系統(tǒng)。液體,只有通過(guò)泵的轉(zhuǎn)動(dòng)而使之流動(dòng)。因此掌握泵的使用要點(diǎn)對(duì)于正確使用HPLC有著至關(guān)重要的意義。

 

1、操作泵之前,用至少兩個(gè)體積(標(biāo)準(zhǔn)脫氣機(jī)30mL,對(duì)微脫氣機(jī)10mL)沖洗真空脫氣機(jī),特別是當(dāng)泵關(guān)閉了一段時(shí)間后(例如:過(guò)夜),以及在通道中使用揮發(fā)性混合溶劑時(shí),防止溶劑瓶?jī)?nèi)的玻璃濾頭(過(guò)濾器)堵塞及長(zhǎng)菌,當(dāng)濾頭表面有黑色或黃色污染層說(shuō)明發(fā)生了堵塞,應(yīng)立即清洗或更換。

2、將裝有溶劑瓶的溶劑箱放在泵上面或較高處。當(dāng)在四元泵上使用鹽溶液或有機(jī)溶劑時(shí),建議將鹽溶液接在下面的梯度閥口上,將有機(jī)溶劑接在上面的梯度閥口上,有機(jī)溶劑通道建議在水或鹽溶液通道的正上面。建議用水定期沖洗所有MCGV通道除去可能在閥口析出的鹽結(jié)晶。
 

3、定期檢查排液閥的過(guò)濾白頭。檢查方法:擰開(kāi)排液閥,以水作流動(dòng)相。

對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)脫氣機(jī)(G1322A),流速5ml/min水,若壓力大于10bar,則建議更換。 

對(duì)于微量脫氣機(jī)(G1379A),流速2ml/min水,若壓力大于5bar,則建議更換。


4、當(dāng)使用低流速時(shí),檢查所有1/16英寸接頭有無(wú)滲漏(用壓力測(cè)試或漏液測(cè)試。每當(dāng)更換泵密封墊時(shí)排液閥慮芯也應(yīng)更換。


5、更換活塞密封墊時(shí)檢查活塞桿上是否有劃痕。有劃痕的活塞將導(dǎo)致輕度滲漏,并降低密封墊的使用壽命。應(yīng)盡早更換有劃痕的活塞。


6、使用緩沖溶液時(shí),關(guān)泵前先用水沖洗系統(tǒng)。當(dāng)需要長(zhǎng)時(shí)間使 用0.1摩爾或更高濃度的緩沖液時(shí),建議選用密封墊清洗附件,以減少對(duì)密封墊及活塞桿的磨損。


7、如果使用了高濃度的緩沖鹽,可以考慮用熱水(50-60℃)來(lái)沖洗鹽通道來(lái)確保沒(méi)有緩沖鹽殘留在系統(tǒng)中。


8、更換活塞密封墊后應(yīng)按照密封墊安裝步驟對(duì)其進(jìn)行磨合,但磨合不適用于正相密封墊。


9、當(dāng)泵頭安裝有柱塞清洗附件時(shí),由于該附件中也有密封墊,這樣就會(huì)增加活塞桿運(yùn)動(dòng)時(shí)的阻力。所以開(kāi)泵前一定要用10%異丙醇,并將其流速調(diào)至約2-3滴/分鐘使溶液流過(guò)沖洗裝置。(對(duì)于二元泵SL,如果不使用鹽溶液可以不開(kāi))10%異丙醇有助于降低水的表面張力,并有抑菌作用。不要用其它溶劑代替。
 

10、當(dāng)泵頭安裝有沖洗附件而不開(kāi)啟10%異丙醇,會(huì)使密封墊及活塞桿的壽命減短(二元泵SL除外),泵頭如果發(fā)出“吱吱”聲不影響使用和泵的精度如果有必要,可以改變壓縮因子(compressibility)來(lái)達(dá)到更好的效果。


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