超液相色譜原理:分配系數與組分、流動相和固定相的熱力學性質有關,也與溫度、壓力有關。在不同的色譜分離機制中,K有不同的概念:吸附色譜法為吸附系數,離子交換色譜法為選擇性系數,凝膠色譜法為滲透參數。但一般情況可用分配系數來表示。
在條件一定,樣品濃度很低時時,K只取決于組分的性質,而與濃度無關。這只是理想狀態下的色譜條件,在這種條件下,得到的色譜峰為正常峰;在許多情況下,隨著濃度的增大,K減小,這時色譜峰為拖尾峰;而有時隨著溶質濃度增大,K也增大,這時色譜峰為前延峰。因此,只有盡可能減少進樣量,使組分在柱內濃度降低,K恒定時,才能獲得正常峰。
超液相色譜是目前應用zui多的色譜分析方法,液相色譜系統由流動相儲液體瓶、輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器和記錄器組成,其整體組成類似于氣相色譜,但是針對其流動相為液體的特點作出很多調整。
超液相色譜時,液體待檢測物被注入色譜柱,通過壓力在固定相中移動,由于被測物種不同物質與固定相的相互作用不同,不同的物質順序離開色譜柱,通過檢測器得到不同的峰信號,zui后通過分析比對這些信號來判斷待測物所含有的物質。
液相色譜法只要求樣品能制成溶液,不受樣品揮發性的限制,流動相可選擇的范圍寬,固定相的種類繁多,因而可以分離熱不穩定和非揮發性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質。由于HPLC具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復利用,流出組分易收集等優點,因而被廣泛應用到生物化學、食品分析、醫藥研究、環境分析、無機分析等各種領域。
超液相色譜主要類型:
1.液液分配色譜分離原理:分配色譜法的原理與液液萃取相同,都是分配定律。
2.液固吸附色譜分離原理:液固色譜是基于各組分吸附能力的差異進行混合物分離的,其固定相是固體吸附劑。
3.鍵合相色譜分離原理:正鍵合相色譜分離遠離:使用的是極性鍵和固定性,溶質在此類固定相上的分離機理屬于分配色譜。